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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10400.5/847

Title: Estudo da inibição da aderência de Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC a células epiteliais de pulmão de bovino
Authors: Carvalho, Catarina Isabel Cruz de
Advisor: Correia, Ivone Carla Costa Borges
Veloso, Maria Gabriela Lopes
Keywords: Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC
Aderência
Adesinas
Proteínas
Vacinas
Células epiteliais de pulmão de bovino
Adherence
Adhesins
Proteins
Vaccines
Bovine lung epithelial cells
Issue Date: 1-Oct-2008
Publisher: Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária
Abstract: A aderência de um agente patogénico às células do hospedeiro é um factor importante no estabelecimento da infecção. Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC (MmmSC), agente causal da peripneumonia contagiosa dos bovinos (PPCB), já foi detectado, por imunohistoquímica, associado à superfície das células do epitélio pulmonar de bovinos com lesões patognomónicas da doença. Também já foi demonstrado que este micoplasma tem capacidade para aderir in vitro a células epiteliais de pulmão de bovino. O objectivo principal deste trabalho foi estudar o envolvimento das proteínas de superfície da membrana do micoplasma no processo de citoaderência. Células epiteliais de pulmão de embrião bovino (EBL) foram infectadas com a estirpe B345/93 de MmmSC, previamente submetida à acção de várias concentrações de proteinase K e tripsina. A citoaderência foi revelada por imunofluorescência indirecta, sendo avaliada por citometria de fluxo e microscopia de fluorescência. Verificou-se uma diminuição significativa da aderência dos micoplasmas às células EBL. Pela determinação da concentração de proteína, da viabilidade e da actividade metabólica dos micoplasmas, foi possível concluir que aquelas enzimas actuaram sobre as proteínas de superfície da membrana dos micoplasmas. A inibição da aderência não foi total, pressupondo-se que outras moléculas possam estar associadas ao processo de citoaderência. No entanto, conclui-se que as proteínas são as moléculas mais importantes na ligação dos micoplasmas às células epiteliais de pulmão de bovino, sugerindo que o desenvolvimento de vacinas, baseadas essencialmente em adesinas proteicas de MmmSC, poderá ser uma abordagem promissora na prevenção da PCB.
ABSTRACT The adherence of a pathogenic agent to its host cells is an important factor to the establishment of infection. Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (MmmSC), the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP), was already detected, by immunohistochemistry, associated to the surface of lung epithelial cells from bovines with pathognomonic lesions of the disease. It was also shown that this mycoplasma has ability to adhere in vitro to bovine lung epithelial cells. The main goal of the present work was to study the involvement of mycoplasma membrane surface proteins in the cytoadherence process. Embryonic bovine lung (EBL) cells were infected with the strain B345/93 previously treated with different concentrations of proteinase K and trypsin. Cytoadherence was revealed by indirect immunofluorescence, being evaluated by flow cytometry and fluorescence microscopy. A significant decrease on the adherence of mycoplasmas to EBL cells was verified. The determination of protein concentration, viability and metabolic activity of mycoplasmas allowed to conclude that those enzymes have cleaved mycoplasma membrane surface proteins. Since total inhibition of mycoplasma adherence was not found, it is assumed that other molecules may be involved in the cytoadherence process. It was concluded, however, that proteins are the major molecules implied in the attachment of MmmSC to bovine lung epithelial cells, suggesting that the development of vaccines, essentially based on proteinaceous adhesins, could be a promising approach in the prevention of CBPP.
Description: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
URI: http://hdl.handle.net/10400.5/847
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