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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10400.5/4585

Title: Caracterização e avaliação da capacidade produtora de biofilmes em estafilococos coagulase negativos isolados de superfícies do ambiente fabril
Authors: Neves, Teresa Cabral Chora Claudino das
Advisor: Fraqueza, Maria João dos Ramos
Keywords: biofilmes
Staphylococcus coagulase negativos
superficies ambiente fabril
starters
biofilms
Coagulase Negative Staphylococci
surfaces on meat processing plants
Issue Date: 12-Jul-2012
Publisher: Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária
Citation: NEVES, T. C. C. C. (2012). Caracterização e avaliação da capacidade produtora de biofilmes em estafilococos coagulase negativos isolados de superfícies do ambiente fabril. Dissertação de Mestrado. Universidade Técnica de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa.
Abstract: Os objectivos deste estudo prendem-se com a identificação e caracterização tecnológica de isolados de estafilococos coagulase negativos provenientes de diferentes salsicharias tradicionais situadas no Alentejo e superfícies do ambiente fabril, avaliando-se a sua capacidade em formar biofilmes e persistência pós-limpeza e desinfecção. Isolaram-se amostras (N=78) de 4 superfícies diferentes (misturadora, picadora, parede da sala de enchimento, enchedora) provenientes de 3 Fábricas do Alentejo, após o qual se fez identificação de espécies de Staphylococcus. Caracterizou-se a sua aptidão tecnológica pelas provas da actividade lipolítica, proteolítica e nitrato-redutase. Para a avaliação fenotípica da capacidade de formar biofilmes utilizou-se o método Congo Red Agar - CRA, caracterizando-se os isolados de acordo com a cor das colónias às 24h e 48h de incubação, e na caracterização genotípica identificaram-se dois genes implicados na formação de biofilme: ica e Bap. Encontraram-se 35 isolados coincidentes com o género Staphylococcus, sendo dominantes 3 espécies diferentes: S. xylosus (N=19), S. saprophyticus (N=11) e S. equorum (N=5). A espécie S. equorum foi apenas isolada na Fábrica A, tendo aparecido na picadora (N=4) e na parede da sala da enchedora (N=1). A enchedora apresentava apenas isolados de S. saprophyticus (S4; N=9), enquanto a misturadora apresentava apenas S. xylosus (S1; N=7). Tanto a picadora como a parede da sala de enchimento apresentavam isolados das 3 espécies. Apenas 20 dos 35 Staphylococcus apresentaram actividade lipolítica, 19 destes identificados como S. xylosus. A actividade proteolítica foi evidenciada por apenas 7 isolados (S. equorum e S. xylosus) e todos pertencentes à Fábrica A. Das 3 espécies identificadas como CNS, 26 isolados apresentaram actividade nitrato-redutase, havendo isolados das 3 espécies consideradas. Maioritariamente os isolados em estudo (N=33) foram formadores de visco/biofilme pelo método fenotípico. Todas as amostras onde se detectou o gene ica eram pertencentes à espécie S. xylosus (N=5) e expressavam forte capacidade (++) formadora de biofilmes (N=5:ica:+;CRA:++). Dos isolados identificados com o gene Bap (N=6), havia estirpes das espécies S. xylosus (N=4) e S. saprophyticus (N=2), havendo 1 destes que apresentou uma fraca capacidade formadora de biofilme (+) (N=5:Bap+;CRA++ e N=1:Bap+;CRA+). Duas estirpes de S. xylosus (S3B5 e S3B7) foram positivas para o ica e para o Bap simultaneamente (N=2:ica+;Bap+). Considerou-se a estirpe S. xylosus S2M6 com potencial utilização como starter uma vez que apresentava características de interesse tecnológico e era fraca formadora de biofilme, não apresentando nenhum dos genes ica e Bap.
ABSTRACT - Characterization and forming biofilms ability from Coagulase Negative Staphylococci isolates in meat processing surfaces - The aims of this work were the identification and technological characterization of Staphylococci isolates obtained from 4 different environment surfaces in 3 meat processing workshops from Alentejo region and to determine their ability to form biofilms. There were 78 samples isolated from 4 environment surfaces (mixing machine, mincing machine, wall from the stuffing room and stuffing machine) in 3 different meat processing workshops and they were identified in order to determine isolates from the genus Staphylococcus. It has also been characterized their tecnological ability for lipolitic, proteolitic and reducing-nitrate activities. For the phenotypic evaluation to form biofilms we used the Congo Red Agar method and by PCR were searched the ica and Bap genes. 35 isolates were identified by PCR as Staphylococcus: 19 S. xylosus, 11 S. saprophyticus and 5 S. equorum. S. equorum (N=5) was only found in workshop A at the surface of mincing machine (N=4) and on the wall of stuffing room (N=1). The stuffing machine had only isolates from S. saprophyticus (S4; N=9), and the mixing machine presented only S. xylosus (S1; N=7). The mincing machines as well the wall of stuffing room had isolates from the 3 species. 20 of the 35 CNS presented lipolitic activity and 19 of these were S. xylosus. Only 7 isolates (S. xylosus and S. equorum) had proteolitic activity and they were all from workshop A. The reducing-nitrate activity was presented by 23 CNS from the 3 identified species. 33 Staphylococcus were strong biofilm formers but only 5 were positive for ica gene and 6 for Bap gene. Every ica positive were S. xylosus and all were strong biofilm formers (N=5:ica:+;CRA:++). The Bap positive isolates were from S. xylosus (N=4) and S. saprophyticus (N=2) species. From the Bap positive isolates it was found one weak positive (N=5:Bap+;CRA++ and N=1:Bap+;CRA+). Two strains of S. xylosus (S3B5 and S3B7) were positive for ica and for Bap genes simultaneously. We considered S. xylosus S2M6 as a potential strain starter because it presented technological abilities and was a weak biofilm former and didn’t present ica nor Bap genes.
Description: Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar
URI: http://hdl.handle.net/10400.5/4585
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DPASA - Teses de Mestrado

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