Utilize este identificador para referenciar este registo: http://hdl.handle.net/10400.5/7598
Título: Epidemiologia, diagnóstico molecular e genética populacional de Theileria annulata em Portugal
Autor: Gomes, Jacinto José Carneiro
Orientador: Gomes, Gabriela Santos
Fonseca, Isabel Soares Pereira da
Palavras-chave: Theileria annulata
Portugal
epidemiologia
diagnóstico molecular
genética populacional
epidemiology
molecular diagnostics
population genetics
Data de Defesa: 7-Nov-2014
Editora: Universidade de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária
Citação: Gomes, J.J.C. (2014). Epidemiologia, diagnóstico molecular e genética populacional de Theileria annulata em Portugal. Tese de Doutoramento. Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa.
Resumo: Theileria annulata é um protozoário do Filo Apicomplexa transmitido por ixodídeos e agente etiológico da theileriose tropical dos bovinos, parasitose reconhecida em Portugal mas cuja distribuição e prevalência ainda não foram devidamente estudadas. A deteção e identificação de espécies de Theileria e Babesia, em 1407 bovinos de Portugal continental, permitiu determinar uma prevalência nacional de animais infetados de 36,8%. T. annulata foi identificada em 21,3% dos bovinos, Theileria buffeli em 10,1% e Babesia bigemina em 7,8% das amostras. Este estudo evidenciou uma elevada prevalência de piroplasmoses no sul do país, com 51,6 % de animais infetados no Alentejo, região onde existem 47% dos bovinos de Portugal continental. As elevadas prevalências sugerem um grande impacto na produção animal, em termos de morbilidade e mortalidade. As técnicas moleculares permitem ultrapassar as desvantagens da microscopia e das técnicas serológicas no diagnóstico da infeção por T. annulata ao possibilitar a identificação de animais portadores com parasitémias muito baixas e detetar co-infeções com outros piroplasmas. Baseado nas tecnologias de PCR, PCR em tempo real e de amplificação isotérmica de ácidos nucleicos foram desenvolvidos métodos moleculares para detetar T. annulata em amostras de sangue de bovino. A técnica de PCR em tempo real revelou especificidade e sensibilidade de 100% e 80% respectivamente, resultados promissores que irão permitir o diagnóstico específico e sensível de T. annulata. A técnica LAMP demonstrou uma concordância muito elevada com o PCR em tempo real e tem a vantagem de poder ser utilizado sem recurso a termocicladores. Foi efetuado um estudo de genética populacional, com recurso a um painel de marcadores micro e minissatélites para determinar (i) a ocorrência de multiplicidade de genótipos infetantes nos bovinos portugueses e (ii) a existência de sub-estrutura populacional e (iii) identificar diferenciação genética relativamente a populações do parasita da Tunísia e a Turquia. A multiplicidade de genótipos co-infetantes detetados na análise de 90 isolados de T. annulata poderá conduzir, por exemplo, ao estudo de marcadores de resistência e a novas vacinas. Foi encontrada grande diversidade genética no estudo das populações, quer entre países diferentes quer no próprio país o que sugere que este parasita terá uma subestrutura populacional geográfica. A utilização destes marcadores não provou existir uma sub-estrutura populacional em Portugal, mas aponta para diferenciação genética moderada com as populações de T. annulata da Tunísia e da Turquia e a necessidade dum estudo diferenciado do parasita em Portugal.
ABSTRACT - Epidemiology, molecular diagnostics and population genetics of Theileria annulata in Portugal - Theileria annulata is a tick-borne apicomplexan protozoan and agent of bovine tropical theileriosis, parasitic disease recognized in Portugal but whose distribution and prevalence has not yet been properly studied. The detection and identification of Theileria and Babesia species in 1407 animals identified a national prevalence of 36.8% infected animals. T. annulata was identified in 21.3%, Theileria buffeli in 10.1% and Babesia bigemina in 7.8% of cattle blood samples. This study showed a high prevalence of piroplasmosis in southern Portugal, with 51.6% of infected animals in the Alentejo region. The high prevalence suggests a major impact on animal production in terms of morbidity and mortality. Molecular techniques can overcome the disadvantages of microscopy and serology techniques for the diagnosis of T. annulata infection, allowing the identification of carrier animals with very low parasitaemia and detect co-infections with other piroplasms. Based on PCR technology, real time PCR and isothermal amplification of nucleic acids, several molecular methods have been developed to detect T. annulata in cattle blood samples. The real-time PCR revealed a specificity and sensitivity of 100% and 80% respectively, results that will allow specific and sensitive diagnosis of T. annulata. The LAMP technique showed a very high correlation with the real-time PCR with the advantage of not using thermal cyclers. A population genetics study, using a panel of micro and minisatellite markers was performed to determine (i) the occurrence of multiplicity of infecting genotypes in portuguese cattle, (ii) the existence of population substructure and (iii) to identify genetic differentiation with to the parasite populations of Tunisia and Turkey. A multiplicity of co-infecting genotypes were detected in the 90 T. annulata isolates and this may result in the study of resistance markers and new vaccines. High genetic diversity was found in the study of populations, both between different countries and within Portugal suggesting a geographic population substructure. However, a population sub-structure was not identified in Portugal, but points to a moderate genetic differentiation with Tunisia and Turkey T. annulata populations, and the need for specific studies in Portugal.
Descrição: Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias. Especialidade de Sanidade Animal
URI: http://hdl.handle.net/10400.5/7598
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